固相萃取(qǔ)操作(zuò)中(zhōng)常見(jiàn)的(de)問(wèn)題(tí)及(jí)原因(yīn)

近(jìn)年(nián)来(lái)，固相萃取(qǔ)技術(shù)應(yìng)用(yòng)得到(dào)快(kuài)速發(fà)展(zhǎn)，已廣泛應(yìng)用(yòng)于(yú)食品、环(huán)境、制藥等行業，成为(wèi)樣(yàng)品前(qián)處(chù)理(lǐ)淨化(huà)的(de)有(yǒu)效手(shǒu)段(duàn)之一(yī)。可(kě)是(shì)，用(yòng)戶在(zài)固相萃取(qǔ)过(guò)程中(zhōng)也(yě)会(huì)遇到(dào)各(gè)種(zhǒng)各(gè)樣(yàng)的(de)問(wèn)題(tí)。

以(yǐ)下(xià)是(shì)固相萃取(qǔ)操作(zuò)中(zhōng)常見(jiàn)的(de)問(wèn)題(tí)：

一(yī)、 回(huí)收(shōu)率低(dī)

在(zài)一(yī)次(cì)完整的(de)SPE操作(zuò)中(zhōng)，目标(biāo)化(huà)合物(wù)可(kě)能(néng)会(huì)存在(zài)于(yú)樣(yàng)品溶液流出(chū)液、淋洗液、洗脫液或(huò)吸附劑中(zhōng)，當“目标(biāo)物(wù)沒(méi)有(yǒu)回(huí)收(shōu)或(huò)回(huí)收(shōu)率低(dī)” 現(xiàn)象(xiàng)發(fà)生(shēng)时(shí)，可(kě)向(xiàng)樣(yàng)品溶液加入(rù)标(biāo)液，然後(hòu)進(jìn)行完整的(de)SPE操作(zuò)並(bìng)将樣(yàng)品流出(chū)液、淋洗液和(hé)洗脫液分(fēn)别收(shōu)集並(bìng)分(fēn)析，首先(xiān)确定目标(biāo)化(huà)合物(wù)存在(zài)于(yú)哪一(yī)部(bù)分(fēn)，進(jìn)而(ér)确定問(wèn)題(tí)来(lái)自(zì)下(xià)列哪一(yī)环(huán)节(jié)：

1、 目标(biāo)化(huà)合物(wù)在(zài)吸附劑上(shàng)保留不(bù)足；

當超过(guò)5%的(de)目标(biāo)化(huà)合物(wù)出(chū)現(xiàn)在(zài)樣(yàng)品流出(chū)液或(huò)淋洗液时(shí)即可(kě)斷定“目标(biāo)化(huà)合物(wù)在(zài)吸附劑上(shàng)的(de)保留不(bù)足”。具體(tǐ)的(de)原因(yīn)如(rú)下(xià)：

a) SPE柱(zhù)選擇不(bù)合适；

b) 樣(yàng)品容积和(hé)淋洗液的(de)洗脫強(qiáng)度(dù)过(guò)強(qiáng)；

c) 樣(yàng)品溶液體(tǐ)积或(huò)濃度(dù)过(guò)高(gāo)，發(fà)生(shēng)“穿透”；

d) 沒(méi)有(yǒu)很好(hǎo)的(de)对(duì)SPE柱(zhù)進(jìn)行預處(chù)理(lǐ)。

2、 目标(biāo)化(huà)合物(wù)违背完全(quán)洗脫；

當目标(biāo)化(huà)合物(wù)在(zài)樣(yàng)品溶液流出(chū)液和(hé)淋洗液中(zhōng)未出(chū)現(xiàn)而(ér)洗脫液中(zhōng)仅有(yǒu)少(shǎo)量或(huò)未出(chū)現(xiàn)时(shí)，可(kě)判斷“目标(biāo)物(wù)未被(bèi)完全(quán)洗脫”。具體(tǐ)的(de)原因(yīn)如(rú)下(xià)：

a) 小柱(zhù)对(duì)化(huà)合物(wù)保留太強(qiáng)，找(zhǎo)不(bù)到(dào)合适的(de)洗脫溶劑；

b) 洗脫液洗脫強(qiáng)度(dù)不(bù)夠；

c) 洗脫液體(tǐ)积太小。

3、 其(qí)他(tā)环(huán)节(jié)。

如(rú)果(guǒ)目标(biāo)化(huà)合物(wù)在(zài)洗脫液中(zhōng)正常出(chū)現(xiàn)，那(nà)麼(me)回(huí)收(shōu)率不(bù)足的(de)問(wèn)題(tí)應(yìng)該来(lái)自(zì)樣(yàng)品前(qián)處(chù)理(lǐ)的(de)其(qí)他(tā)环(huán)节(jié)。具體(tǐ)的(de)原因(yīn)如(rú)下(xià)：

a) SPE前(qián)的(de)提(tí)取(qǔ)效率不(bù)足；

b) 前(qián)處(chù)理(lǐ)步驟太繁琐，目标(biāo)化(huà)合物(wù)損失；

c) 目标(biāo)物(wù)揮發(fà)性(xìng)較強(qiáng)，在(zài)濃縮步驟損失；

d) 目标(biāo)化(huà)合物(wù)在(zài)前(qián)處(chù)理(lǐ)溶劑环(huán)境中(zhōng)分(fēn)解(jiě)。

二(èr)、 萃取(qǔ)重(zhòng)現(xiàn)性(xìng)差

在(zài)使用(yòng)固相萃取(qǔ)小柱(zhù)進(jìn)行樣(yàng)品前(qián)處(chù)理(lǐ)时(shí)，若出(chū)現(xiàn)萃取(qǔ)效果(guǒ)重(zhòng)現(xiàn)性(xìng)差，可(kě)能(néng)的(de)原因(yīn)及(jí)改進(jìn)辦(bàn)法(fǎ)如(rú)下(xià)：

1、 上(shàng)樣(yàng)前(qián)，柱(zhù)床干(gàn)涸。改進(jìn)方(fāng)法(fǎ)：重(zhòng)新火(huǒ)花並(bìng)平衡。

2、 吸附劑填装不(bù)緊。改進(jìn)方(fāng)法(fǎ)：提(tí)出(chū)換貨，或(huò)用(yòng)小棍擠压柱(zhù)床。

3、 樣(yàng)品液流速过(guò)快(kuài)。改進(jìn)方(fāng)法(fǎ)：降低(dī)流速，通(tòng)常来(lái)说(shuō)流速低(dī)于(yú)5mL/min时(shí)，結果(guǒ)是(shì)穩定的(de)。

4、 超出(chū)小柱(zhù)的(de)载(zài)樣(yàng)能(néng)力。改進(jìn)方(fāng)法(fǎ)：減小载(zài)樣(yàng)量，或(huò)用(yòng)規格更(gèng)大(dà)的(de)SPE小柱(zhù)。

5、 洗脫機(jī)用(yòng)量不(bù)足。改進(jìn)方(fāng)法(fǎ)：增加洗脫機(jī)的(de)用(yòng)量或(huò)者(zhě)用(yòng)更(gèng)小規格的(de)SPE小柱(zhù)。

三(sān)、 淨化(huà)效果(guǒ)不(bù)理(lǐ)想(xiǎng)

1、 淨化(huà)模式的(de)改進(jìn)

通(tòng)常而(ér)言采用(yòng)保留目标(biāo)化(huà)合物(wù)的(de)模式比保留雜质的(de)模式淨化(huà)效果(guǒ)好(hǎo)，如(rú)果(guǒ)正在(zài)分(fēn)析的(de)項目为(wèi)某一(yī)種(zhǒng)或(huò)某一(yī)類(lèi)化(huà)合物(wù)分(fēn)析，最(zuì)好(hǎo)是(shì)采用(yòng)保留目标(biāo)化(huà)合物(wù)的(de)淨化(huà)模式；举一(yī)个(gè)簡單的(de)例子，同(tóng)樣(yàng)是(shì)分(fēn)析蔬菜中(zhōng)的(de)多(duō)菌靈和(hé)噻菌靈(一(yī)類(lèi)碱性(xìng)農藥)，使用(yòng)陽離子交換柱(zhù)可(kě)以(yǐ)專一(yī)性(xìng)地(dì)保留这些(xiē)農藥，使它(tā)们(men)基本與(yǔ)干(gàn)擾物(wù)完全(quán)分(fēn)離，而(ér)使用(yòng)正相吸附劑或(huò)石(dàn)墨(mò)化(huà)炭黑(hēi)進(jìn)行保留干(gàn)擾物(wù)的(de)操作(zuò)仅能(néng)把(bǎ)主(zhǔ)要(yào)的(de)干(gàn)擾物(wù)除去(qù)，仍有(yǒu)較多(duō)干(gàn)擾物(wù)存留。

另(lìng)外(wài)，如(rú)果(guǒ)不(bù)止一(yī)種(zhǒng)SPE柱(zhù)可(kě)用(yòng)于(yú)目标(biāo)化(huà)合物(wù)的(de)淨化(huà)时(shí)，應(yìng)挑選選擇性(xìng)好(hǎo)的(de)吸附劑；選擇性(xìng)方(fāng)面(miàn)，離子交換＞正相＞反(fǎn)相。

2、 淋洗液和(hé)洗脫液的(de)優化(huà)

对(duì)于(yú)反(fǎn)相模式和(hé)正相模式，應(yìng)在(zài)不(bù)影響回(huí)收(shōu)率的(de)前(qián)提(tí)下(xià)，增大(dà)淋洗液洗脫的(de)強(qiáng)度(dù)並(bìng)降低(dī)洗脫液的(de)洗脫強(qiáng)度(dù)。

对(duì)于(yú)反(fǎn)相模式，可(kě)将目标(biāo)化(huà)合物(wù)的(de)水(shuǐ)溶液上(shàng)樣(yàng)，然後(hòu)依次(cì)用(yòng)5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的(de)甲醇水(shuǐ)溶液洗脫，分(fēn)别收(shōu)集洗脫液分(fēn)析，建立淋洗曲(qū)線(xiàn)，找(zhǎo)出(chū)目标(biāo)化(huà)合物(wù)被(bèi)洗脫时(shí)的(de)溶劑體(tǐ)系，淋洗液中(zhōng)甲醇的(de)含量應(yìng)稍低(dī)于(yú)目标(biāo)化(huà)合物(wù)恰好(hǎo)被(bèi)洗脫时(shí)的(de)溶劑體(tǐ)系，而(ér)洗脫液中(zhōng)甲醇的(de)含量應(yìng)稍高(gāo)于(yú)目标(biāo)化(huà)合物(wù)恰好(hǎo)被(bèi)完全(quán)洗脫时(shí)的(de)溶劑體(tǐ)系；當純甲醇不(bù)能(néng)洗脫目标(biāo)化(huà)合物(wù)时(shí)，應(yìng)试验(yàn)甲醇-甲基叔丁基醚混合溶液的(de)洗脫曲(qū)線(xiàn)；对(duì)于(yú)某些(xiē)既不(bù)溶于(yú)水(shuǐ)也(yě)不(bù)溶于(yú)甲醇的(de)離子型化(huà)合物(wù)，可(kě)以(yǐ)在(zài)溶劑體(tǐ)系中(zhōng)加入(rù)酸(suān)或(huò)碱。

对(duì)于(yú)正相體(tǐ)系，可(kě)将目标(biāo)化(huà)合物(wù)的(de)正己烷溶液上(shàng)樣(yàng)，然後(hòu)依次(cì)用(yòng)5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的(de)正己烷甲基叔丁基醚溶液洗脫，分(fēn)别收(shōu)集洗脫液分(fēn)析，建立淋洗曲(qū)線(xiàn)，找(zhǎo)出(chū)目标(biāo)化(huà)合物(wù)被(bèi)洗脫时(shí)的(de)溶劑體(tǐ)系，淋洗液中(zhōng)甲基叔丁基醚的(de)含量應(yìng)稍低(dī)于(yú)目标(biāo)化(huà)合物(wù)恰好(hǎo)被(bèi)洗脫时(shí)的(de)溶劑體(tǐ)系，而(ér)洗脫液中(zhōng)甲基叔丁基醚的(de)含量應(yìng)稍高(gāo)于(yú)目标(biāo)化(huà)合物(wù)恰好(hǎo)被(bèi)完全(quán)洗脫时(shí)的(de)溶劑體(tǐ)系。

3、 对(duì)SPE柱(zhù)進(jìn)行合理(lǐ)的(de)處(chù)理(lǐ)

SPE柱(zhù)中(zhōng)的(de)吸附劑可(kě)能(néng)存在(zài)少(shǎo)量干(gàn)擾物(wù)，有(yǒu)效地(dì)活化(huà)可(kě)以(yǐ)避免这些(xiē)干(gàn)擾物(wù)進(jìn)入(rù)洗脫液，活化(huà)溶液應(yìng)選擇整个(gè)操作(zuò)中(zhōng)洗脫強(qiáng)度(dù)最(zuì)強(qiáng)的(de)溶劑體(tǐ)系；在(zài)反(fǎn)相模式中(zhōng)，從樣(yàng)品溶液到(dào)洗脫液主(zhǔ)要(yào)涉及(jí)0%-100%甲醇水(shuǐ)溶液，所(suǒ)以(yǐ)活化(huà)溶液應(yìng)選純甲醇，當目标(biāo)化(huà)合物(wù)需要(yào)用(yòng)甲醇-甲基叔丁基醚混合液洗脫时(shí)，活化(huà)溶液應(yìng)選甲基叔丁基醚；在(zài)正相模式中(zhōng)，從樣(yàng)品溶液到(dào)洗脫液主(zhǔ)要(yào)涉及(jí)0%-100%正己烷-甲基叔丁基醚溶液，所(suǒ)以(yǐ)活化(huà)溶液應(yìng)選純甲基叔丁基醚。

四(sì)、 SPE柱(zhù)流速过(guò)低(dī)

使用(yòng)固相萃取(qǔ)小柱(zhù)过(guò)程中(zhōng)，若出(chū)現(xiàn)SPE柱(zhù)流速过(guò)低(dī)的(de)情(qíng)況，可(kě)能(néng)的(de)原因(yīn)及(jí)改進(jìn)辦(bàn)法(fǎ)如(rú)下(xià)：

1、 樣(yàng)品溶液含有(yǒu)較多(duō)颗(kē)粒(lì)雜质，堵塞了(le)篩闆。改進(jìn)辦(bàn)法(fǎ)：上(shàng)樣(yàng)前(qián)对(duì)樣(yàng)品溶液進(jìn)行離心(xīn)或(huò)过(guò)濾。

2、 樣(yàng)品溶液黏度(dù)太高(gāo)。改進(jìn)辦(bàn)法(fǎ)：用(yòng)樣(yàng)品溶液对(duì)樣(yàng)品進(jìn)行稀釋。

3、 SPE柱(zhù)柱(zhù)床太高(gāo)，对(duì)液體(tǐ)的(de)阻力过(guò)大(dà)。改進(jìn)辦(bàn)法(fǎ)：使用(yòng)輔助工具：使用(yòng)固相萃取(qǔ)儀，並(bìng)在(zài)液體(tǐ)路(lù)出(chū)口(kǒu)減压；在(zài)液體(tǐ)入(rù)口(kǒu)加压。

其(qí)实，只(zhī)需要(yào)一(yī)台(tái)鼎泰恒勝全(quán)自(zì)動(dòng)固相萃取(qǔ)儀，就(jiù)可(kě)以(yǐ)避免大(dà)部(bù)分(fēn)的(de)問(wèn)題(tí)。自(zì)動(dòng)完成固相萃取(qǔ)全(quán)过(guò)程：柱(zhù)活化(huà)-上(shàng)樣(yàng)-柱(zhù)淋洗-柱(zhù)干(gàn)燥-柱(zhù)洗脫，自(zì)動(dòng)完成柱(zhù)切(qiè)換等功能(néng)，实現(xiàn)批量樣(yàng)品的(de)處(chù)理(lǐ)。